Syftet med stringenstvätt är att få bort prober som bundit ospecifikt.Prober som har bundit specifikt till dna:t i provet kommer att vara kvar då de sitter bättre pga bättre komplementär basparing.
För att detektera en hybridisering av proben till dess målsekvens så har proben märkts med antingen radioaktiva molekyler eller icke radioaktiva molekyler som tex fluorescens.I vårt fall använder vi oss av ett DIG-system som är icke radioaktivt.
Efter hybridisering med probe.Brunn 1.neg.kontr,brunn 7-PCR-prov,brunn 8-pos.kontr
Det man kan konstatera från de båda bilderna är att vi fått smear i både brunn1 och 8 samt i 7 men dock visar brunn 7 som är vårt PCR-prov upp ett tydligt band vilket förhoppningsvis tyder på LL37.Att vi fått smear tyder på att vi fått ospecifik amplifiering av det som kommit ner i rören,primrarna har hybridiserat på flera ställen.
Nu
har du gjort både PCR och Southern. Syftet med bägge metoderna var att ta reda
på om LL 37-genen fanns i plasmiden. Jämför resultatet och diskutera för-och
nackdelar med metoderna.
Metoden för Southern tar betydligt längre tid samt att det är fler steg än PCR vilket innebär
att det finns större risk att något går fel på vägen.Båda metoderna skulle jag säga är känsliga och kräver precision.
Vad
tycker du är det viktigaste som du har lärt dig under
laborationen?
Något av det viktigaste jag lärt mig är att noggrannhet är A och O när man jobbar med laborationer samt förberedelse och planering.Jobbar man med en medlaborant är det viktigt att man samarbetar och kompletterar varandra bra vilket var fallet här.
